ブログ

Jun 10, 2024

電圧の変異をスクリーニングするための新しい戦略

貧困の感染症第 12 巻、記事番号: 74 (2023) この記事を引用 231 アクセス 1 Altmetric Metrics の詳細 ヒトスジシマカの現在の予防および制御戦略

貧困の感染症 第 12 巻、記事番号: 74 (2023) この記事を引用

231 アクセス

1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

ヒトスジシマカの現在の予防および制御戦略は、環境管理や化学物質管理などの包括的な管理に大きく依存しています。 しかし、ピレスロイドの広範な適用により、主に電位依存性ナトリウムチャネル (VGSC) 遺伝子の変異を介して殺虫剤耐性の発達が促進されています。 この研究は、Ae の VGSC 遺伝子の変異を検出するための新しい戦略を開発することを目的としています。 マルチプレックス PCR 質量分析 (MPCR-MS) ミニシーケンス技術を使用したヒトスジシマカ。

我々は、Ae の VGSC 遺伝子の変異を検出するための新しい戦略を確立しました。 MPCR-MS ミニシーケンス技術を使用したヒトスジシマカ。 最初に MPCR 増幅とマス プローブ エクステンション (MPE) が使用され、続いて一塩基多型 (SNP) タイピング質量分析法が使用されました。これにより、Ae の 96 サンプル中の VGSC 遺伝子の複数の変異部位を同時に検出できます。 ヒトスジシマカ。 合計70匹の野生採集Ae。 ヒトスジシマカは、他の方法と比較することによってこの方法の性能を評価するために使用されました。

VGSC 遺伝子の 3 つの標的部位 (1016、1532、1534) は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化 - 飛行時間型質量分析法と組み合わせたダブル PCR 増幅によって同時に検出でき、検出限界 20 fg/μl を達成します。 この方法を野生で収集された 70 匹の Ae に適用しました。 得られた遺伝子型は日常的な配列決定結果と一致しており、我々の方法の精度が示唆されています。

MPCR-MS ミニシーケンス技術は、Ae に対する高感度かつ高スループットのアプローチを提供します。 ヒトスジシマカ VGSC 遺伝子変異スクリーニング。 従来のシーケンスと比較して、この方法は経済的で時間の節約になります。 これは、媒介生物媒介疾患のリスクが高い地域における殺虫剤耐性の監視にとって非常に価値があります。

ヒトスジシマカは、デング熱ウイルス、チクングニヤウイルス、ジカウイルスなどのアルボウイルスを感染させる主要なベクターです[1、2、3]。 Ae は、急速に繁殖し、攻撃的な行動をとる最も侵入的な蚊の種の 1 つです [4、5]。 ヒトスジシマカは、世界 70 か国以上でその存在感を発揮することに成功しました [6]。 現在、Ae. ヒトスジシマカは生物学的、化学的、物理的方法を組み合わせて防除されており、化学殺虫剤は主に蚊を直接殺すために使用されます [7、8]。 これらの殺虫剤の中で、ピレスロイドはそのスペクトルが広く、効率が高く、哺乳類に対する毒性が低いため、最も広く使用されています[9、10]。

VGSC 遺伝子によってコードされる電位依存性ナトリウム チャネルは、ピレスロイド系殺虫剤の主な標的です。 VGSC 遺伝子の変異により、Ae の感受性が低下する可能性があります。 ヒトスジシマカはピレスロイドに対して感染し、ノックダウン耐性をもたらします [11]。 最初のセンス変異 (F1534C) は 2011 年にシンガポールで発見されました [12]。 AeのVGSC遺伝子座の配列。 ヒトスジシマカは、イエバエのナトリウムチャネルの番号付けに基づいて決定されます[13]。 AeのVGSC遺伝子には複数の変異部位が見つかっている。 ヒトスジシマカ [14,15,16,17,18,19,20]、およびそれらのうちの 3 つ (1016、1532、および 1534) は、ノックダウン耐性と関連していることが確認されています [11]。 コドン部位 1016 での GTA から GGA への変異により、アミノ酸がバリン (V) からグリシン (G) に変化します [21]。 遺伝子座 1532 では、ATC (イソロイシン、I) が ATA (イソロイシン、I) または ACC (スレオニン、T) に変異する可能性があります [14]。 遺伝子座 1534 では、野生型 TTC (フェニルアラニン、F) が TTT (フェニルアラニン、F) に同義的に変異するか、TCC/TCG (セリン、S)、TGC (システイン、C)、TTG/CTG/CTC に非同義的に変異する可能性があります。 /TTA (ロイシン、L)、CGC (アルギニン、R)、または TGG (トリプトファン、W) [12、16、18、19、20]。

現在、Ae における VGSC 遺伝子の変異が検出されています。 ヒトスジシマカは、DNA 配列決定または対立遺伝子特異的 PCR (AS-PCR) に依存しています。 DNA シーケンスは最も広く使用されており、VGSC 変異を検出するためのゴールドスタンダードと考えられています。 ただし、DNA 配列決定技術は、コストと時間がかかるため、大量のサンプルを使用する研究には適していません [19]。 AS-PCR [19] は、Ae における VGSC の変異を検出するためにも使用されています。 しかし、特異性が比較的低く、単一部位の検出にのみ適しています。 したがって、Ae における VGSC 変異の迅速、正確、経済的な、複数部位の検出方法が開発されました。 ヒトスジシマカは緊急に必要です。